肉的宰后嫩化常见归因于肌原化学玻纤结构的特征的弄坏，肌原化学玻纤结构的特征是由内源性蛋清电离酶化学降解塑料肌原化学玻纤和内部骨架蛋清引发的。与十几年来直是观注对象的钙蛋清酶不一样，胱天蛋清酶（caspases）这段时间当上感业余爱好搞笑的话题。胱天蛋清酶在内部凋亡的履行关键时期起着得尤为重要的的角色，在这当中caspase-3在生前蛋清电离中的角色是双因素和繁复的，因为指的进这一步钻研。S-亚硝基化实现改善钙放、热量产生、蛋清质化学降解塑料和内部凋亡来改善肉肥，具有嫩度和持水程度。后期钻研出现 S-亚硝基化能够再降依赖症线粒体的caspase-3级联发生反应，这将会是肌群内部凋亡和羊肉品性发生改变的原故。caspase-3的钻研核心是其与内部凋亡的联系，虽然，不大有钻研浅议S-亚硝基化改善caspase-3的共识机制。

2024年9月由武汉农林牧大学专业张万刚教导微商团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物学为该研究提供了亚硝基化遮盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文翻译网站标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2026年反应细胞：5.7

提出时刻：2024年9月

企业客户厂家：南京农业大学

钻研涂料：蛋白

拜谱具备方法：亚硝基化修饰组学

方法路线地图：

一、设计结论

01.Caspase-3活性酶

现如今尚不很清楚NO对caspase-3的仰自制用可否归因于NO介导的S-亚硝基化，各不相同盐浓度均值的GSNO成为外源性NO供给，以帮助caspase-3的体内S-亚硝基化。結果反映出，与没得GSNO的组比较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3化学活化酶明显削减（图1），与事先新闻稿件不符。GSNO解决削减caspase-3化学活化酶的未知因为仍仍待相一致。

图1 不一样的溶液浓度的GSNO正确处理对caspase-3活力性的影向

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化系数

探讨Caspase-3的亚硝基化度，以确立GSNO对Caspase-3的化学反应性。经GSNO工作后，检则到caspase-3蛋清S-亚硝基化的强度加入（图2）。此类没想到表面，外源性GSNO培养出可成功的诱发caspase-3的离体S-亚硝基化。这令诧异的是，在沒有GSNO现实存在的剖析组中检则到的暗淡的S-亚硝基化带，这表面caspase-3已经造成内源性的S-亚硝基化。除此之外，本探讨中caspase-3的S-亚硝基化度较高，而caspase-3的特异形有效降低，这与前几天的探讨一致性。而是，caspase-3的特异形S-亚硝基化绘制位点尚不明白，还必须进那步的探求。

图2 GSNO外理对caspase-3S-亚硝基化层次的不良影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。天蓝色箭头的字段带表S-亚硝基化肽，颜色箭头的C带表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3分解结淀粉酶

结核球蛋清看做那种根本的内部骨架核球蛋清，在维护肌内部设备构造的设备构造全面性和紧缩性个方面起着根本使用，分析S-亚硝基化caspase-3对结核球蛋清化学光降解的敏感度性具备有根本目的意义。与Std（未用胱天核球蛋清酶-3和GSNO孵育的初始状态肌钎维棉核球蛋清）组优于，0 μM GSNO组（肌原钎维棉和caspase-3的孵育，无GSNO）的全面结核球蛋清氧化还原电位可观减小，提醒caspase-3对结核球蛋清具备有意向的核球蛋清淀粉水解技能。在GSNO孵育后，全面结核球蛋清的氧化还原电位特别加剧（P < 0.05）。与此同时，当GSNO氧化还原电位增大时，全面结核球蛋清的氧化还原电位一直调整（P < 0.05）（图5）。一项发觉表达，SNO掩盖的caspase-3以层次依赖关系的行为限制结核球蛋清的化学光降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3化学降解结蛋白酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙球蛋白-T

肌钙蛋清质质-T (TnT)是原肌球蛋清质质调低全权负责全身肌肉抽缩的细细的的必要肌原植物弹性纤维棉蛋清质质。TnT的溶解优点是检侧到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化条件下，caspase-3对TnT的溶解症状如图是6随时，与Std组（不添加caspase-3和GSNO的肌原植物弹性纤维棉）相比较，caspase-3组中30 kDa TnT段落有特别增高，证明caspase-3进行了TnT的溶解，不但，caspase-3与GSNO的孵育印象30 kDa TnT减低。在100和200 μM GSNO组直接不会检侧到特别的性别差异(P > 0.05)，而当GSNO的氧化还原电位以达到400 μM 时，该段落有特别缩短(P < 0.05)。这个看到证明了SNO表达的caspase-3对TnT溶解的抑止效用。结蛋清质质和TnT是caspase-3的明感底物，而GSNO处里减少caspase-3的特异性机会印象肌原植物弹性纤维棉蛋清质质溶解数量减少。上面所诉，NO分析的S-亚硝基化可以按照表达半胱氨酸残基来调低caspase-3的特异性，必将进第一步印象其对结蛋清质质和TnT的蛋清质质油脂水解学习能力，因此印象牛肉片质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3化学降解肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本论述广泛宣传论述S-亚硝基化对caspase-3呈现的引响非常然后对鸡肉片肌原钎维体内生物降解的引响。球核蛋白质S-亚硝基化应该呈现caspase-3的半胱氨酸残基，关键在于出现caspase-3催化活性缩减，进十步抑制作用了其对鸡肉片肌原钎维球核蛋白质的球核蛋白质电离力。

三、拜谱个人心得体会

论述适用了酶活的研究分析，亚硝基化淡化组学的研究分析，WB等检则方法手段，看到球蛋白酶酶质S-亚硝基化就能够淡化caspase-3的半胱氨酸残基，这造成 了caspase-3活性酶类的减低，相结那步可以抑制了其对牛羊肉肌原人造纤维球蛋白酶酶质的球蛋白酶酶质水解反应学习能力。本论述为解说球蛋白酶酶质质亚硝基化对肉嫩的干预考核机制给予打了个个新的感觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的球高蛋清组学、表达球高蛋清组学、排泄组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸货品系列货品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total脱色抹除、游离子巯基，欢迎大家咨询！

考生专著：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663